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ELISA实验中标准曲线的绘制（附软件下载链接）
在定量ELISA实验中，通常利用已知浓度的标准品建立 OD值与浓度之间的标准曲线， 再根据待测样品的OD值计算相应浓度。 本文以Curve Expert 1.3为例介绍标准曲线绘制、 曲线拟合和样品浓度计算方法。
绘制标准曲线前的准备
开始拟合前，需要整理标准品及待测样品的实验数据。
建议准备以下信息
- 标准品浓度及对应OD值；
- 按实验方案处理后的Blank数据；
- 待测样品OD值；
- 样品稀释倍数；
- 标准品浓度单位。
标准品浓度与OD值应一一对应。 如使用重复孔，应按照实验方案整理用于后续拟合的数据。
Curve Expert绘制ELISA标准曲线
1. 启动 Curve Expert
打开Curve Expert 1.3，准备录入标准品数据。
2. 输入标准品OD值和浓度
按原示例，在X轴输入标准品OD值； 双抗体夹心实验可输入OD减去Blank后的数值。 在Y轴输入对应的标准品浓度。
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3. 打开曲线拟合窗口
数据输入完成后，点击曲线拟合按钮
，进入模型选择窗口。
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4. 生成并查看拟合曲线
点击OK后， 软件会生成候选拟合模型。 依次选择模型可查看对应的拟合曲线。
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5. 选择拟合曲线
比较各模型与标准品数据的拟合情况， 并查看软件提供的相关系数。
注意： 按原示例，可使用软件显示的 r值辅助判断拟合程度。 r值越接近1，表示拟合结果与输入数据的相关程度越高。 同时应结合标准品数据与拟合曲线的整体表现进行判断。
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6. 计算待测样品浓度
按Ctrl + L打开计算窗口， 输入待测样品OD值并点击 Calculate， 即可得到对应浓度。
如果样品进行了N倍稀释， 最终结果还需按实际稀释倍数换算。
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7. 获取拟合曲线方程
在拟合结果窗口空白处单击鼠标右键， 选择Information。 在弹出的窗口中点击 Copy， 即可复制拟合方程及参数。
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原示例输出结果
Rational Function: y=(a+bx)/(1+cx+dx^2)
a = -5.9369973
b = 166.94422
c = 1.8471095
d = -0.86731519
方程形式及系数取决于实际标准品数据和所选拟合模型。
8. 调整曲线图形属性
选择Graph Properties， 可修改X轴、Y轴及其他图形显示参数。
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标准曲线结果分析注意事项
完成拟合后，除查看软件计算结果外， 还应结合标准品范围、样品稀释倍数和实验记录判断最终浓度。
数据分析时建议检查
- 标准品浓度与OD值是否对应正确；
- Blank是否按照实验方案处理；
- 拟合曲线是否能够合理覆盖标准品数据；
- 待测样品检测信号是否位于标准曲线有效范围内；
- 是否按实际稀释倍数换算样品浓度；
- 浓度单位是否与标准品保持一致。
如果待测样品的信号明显超出标准品覆盖范围， 应结合具体实验方案判断是否需要调整样品条件后重新检测， 不宜仅依赖曲线外推获得结果。
Curve Expert 1.3软件下载
本文操作示例使用Curve Expert 1.3。 以下按钮跳转至外部软件下载页面， 请根据所在单位的软件使用及信息安全要求自行确认后使用。
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